琼脂糖凝胶电泳分离DNA与聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质原理方法上有什么...DNA电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳，电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷。琼脂糖电泳是怎样制胶的?谢谢各路大侠!首先PCR电泳主要是琼脂糖凝胶电泳。即成1.0%琼脂糖凝胶液。用于电泳检测PCR产物的琼脂糖浓度常为1%2%，应该使用纯度高的电泳纯级琼脂糖，这种琼脂糖已除去了荧光抑制剂及核酸酶等杂质。

1.琼脂糖凝胶电泳同时点分子量marker，根据marker条带判断产物分子量大小，从而大致判断是不是你要的2.酶切已知你产物的序列，看上面有什么酶切位点，用一个酶或者两个酶切断，看与理论预测的条带数目和大小是否一致。一般检测有以上两步就行了，如果需要知道确切的需要进行33.测序连接到pMD18t载体上，转到大肠杆菌中。

其原理是不同大小的DNA分子通过琼脂糖凝胶时，由于泳动速度不同而被分离，经溴化乙锭（EB）染色，在紫外光照射下DNA分子发出荧光而判定其分子的大小。用于电泳检测PCR产物的琼脂糖浓度常为1%2%，应该使用纯度高的电泳纯级琼脂糖，这种琼脂糖已除去了荧光抑制剂及核酸酶等杂质。（1）制胶琼脂糖凝胶厚度约为3~5mm。过薄则加样孔样品会溢出来，过厚观察时荧光穿透不强以至有些小片段DNA带型不易分辨。

首先PCR电泳主要是琼脂糖凝胶电泳。电泳仪有正负极的，而DNA是带负电荷的。故而向正方向移动。然后，DNA里是有碱基的。碱基可以吸收紫外光。最重要的是有染色剂，常用的有溴化乙锭等等。一般在配制凝胶的时候会加进去，或者跑完电泳然后将凝胶浸在含有染色剂的溶液里，染色剂可以插入DNA链中。在可见光下是看不见条带的，但在紫外光照射下就能出现条带。

融胶液，可以使琼脂糖凝胶完全融化。同时采用了一种新型的离子交换柱，在特定条件下，使DNA能在离心过柱的瞬间，结合到DNA纯化柱上，在一定条件下又能将DNA充分洗脱，从而实现DNA的快速纯化。1.低熔点琼脂糖挖块法：在琼脂糖主链导入羟乙基修饰后，其凝固点温度降为30度，熔化温度为65度，这一温度低于绝大多数双链DNA的变性温度，利用这类凝胶纯度高熔点低的特点，在水平式琼脂糖凝胶电泳上，使所需的目的DNA片段转移到低熔点琼脂糖凝胶内，经65度水浴510分钟，使之溶化，用饱和酚抽提，就可以分离到所需DNA.2.玻璃棉离心法：利用玻璃棉为支持介质，通过离心，使含有目的基因DNA片段的溶液从凝胶中析出，经离心管底部的小孔流入套管，再用酚纯化、乙醇沉淀，获得所需的目的基因片段。

一、实验名称：质粒DNA的提取与纯化，DNA琼脂糖凝胶电泳二、实验原理：1.质粒DNA的提取：质粒是一类存在于几乎所有细菌等微生物中染色体之外（细胞质中）呈游离状态的双链、闭环的DNA分子，能够自主复制和稳定遗传，以超螺旋形式存在，是最常用的基因克隆载体。除质粒外，大肠杆菌中还含有基因组DNA、各种RNA、蛋白质和脂质等物质，因此需要裂解细胞并除去蛋白质和染色体DNA等物质才能分离纯化出质粒DNA。

在实际操作中可以根据宿主菌株类型、质粒分子大小、碱基组成和结构等特点以及质粒DNA的用途进行选择。本实验使用碱裂解法，即利用SolutionⅠ、Ⅱ、Ⅲ三种溶液分离提取质粒DNA.其原理如下。（1）碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理：碱裂解法提取质粒DNA是根据共价闭合环状质粒DNA和线性染色体DNA之间变性与复性的差异来分离质粒DNA，达到分离提纯质粒DNA的目的。

你好：我所知道的酶切的目的大致分为两大类：载体的检测和southern预备实验。你做的如果是常规的PCR检测，一般不需要酶切后再电泳，只是检测一下你的目的基因是否成功进入你的受体材料，酶切后反而看不出来了。酶切的依据是你自己的载体图中酶切位点的位置与类别，根据不同的酶切位点选择不同种类的酶。酶切位点一般设置在你插入的目的基因的两侧，如此一来，经过简单的酶切，就可以将你所需要的目的条带完整的切下来，再经过琼脂糖凝胶电泳将两者分离。

1、制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7g(0.5g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液。2、胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,

并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。3、室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中。添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止。扩展资料：储藏温度:常温商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia），BioGelA（美国BioRad）等。

DNA电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳，电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷。蛋白质电泳（一般指SDSPAGE）一般使用的都是聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。所以相同点就是样品都是带负电荷的，从负极向正极移动，移动的距离都和样品的分子量有关。而且这两个电泳体系可以互相交换使用。进行大分子蛋白质电泳时，可以考虑换用琼脂糖凝胶，因为该体系孔径大。

不同点首先是样品不同。这个就不用多说了。其次是结果的观察方法不同。DNA电泳普遍使用EB做染料，在紫外灯下观察；而蛋白电泳使用的考马斯亮蓝染色，还需要经过脱色步骤，不过观察起来比较简单。还有就是胶体系的差别，DNA电泳通常是一胶跑到底，而蛋白质电泳则会有分离胶和浓缩胶之区别。电泳中样品移动的本质确实是样品所携带的电荷。

琼脂是海藻提取物，属于多糖，在高温下熔解，低温时凝固，琼脂分子间有间隙（琼脂的浓度越小，分子间的间隙越大，通过的物质的分子量也就越大），在电流的作用下，带电的物质可以发生定向移动，通过琼脂糖凝胶电泳，可以将不同大小分子量的物质分开，在通过marker,就可以大概判断待测物质的分子量大小，这个在分子生物方面应用比较广泛，如DNA，RNA电泳，或者在进行southern杂交，northern杂交。